Optimización de una técnica de medida de disrupción endocrina por medio de Saccharomyces cerevisiae recombinantes

  • Karen Keel Departamento de Aguas y Productos Químicos, Laboratorio Tecnológico del Uruguay (LATU), Uruguay
  • Diana Míguez Departamento de Aguas y Productos Químicos, Laboratorio Tecnológico del Uruguay (LATU), Uruguay http://orcid.org/0000-0001-5364-5951
  • Ana Soares Cranfield University, School of Applied Science, Centre for Water Science, College Road, Cranfield, Bedfordshire, MK430AL. Reino Unido
  • Adriana Parodi Sección Genética, Facultad de Ciencias, Universidad de la República, Uruguay, Unidad de Biología Molecular, Instituto Pasteur, Uruguay

Resumen

Los disruptores endocrinos son sustancias químicas, exógenas al organismo, capaces de alterar la homeostasis del sistema endocrino-reproductivo. Un grupo de ellos, los compuestos estrogénicos, pueden ocasionar efectos negativos sobre la capacidad reproductiva de algunos peces, disminución de la fertilidad, la aptitud sexual y la producción de esperma y feminización de los machos. En este trabajo se describe el desempeno analítico de un método para la cuantificación de estrogenicidad en aguas. Se utilizó la técnica Yeast Estrogen Screen (YES) con Saccharomyces cerevisiae recombinante, una levadura modificada genéticamente que expresa el receptor de estrógenos humano y un plasmido de expresión con el gen reportero lacZ, bajo el control de elementos de respuesta a estrógenos. Dicho gen codifica para la ƒÀ-galactosidasa, que se secreta al medio y metaboliza un sustrato cromogénico, observandose un cambio de color que se mide a 420 nm. Se utilizaron estándares de 17 ƒÀ-estradiol para realizar una curva de calibración en el rango de concentraciones entre 1.75 ng/l y 7.5 ƒÊg/l. Las curvas sigmoides dosis.respuesta obtenidas se ajustaron mediante la función de Hill y los r2 fueron mayores a 0,95. El limite de detección fue de 55 ng/l. La estrogenicidad para las muestras ensayadas fue no detectable.

Descargas

La descarga de datos todavía no está disponible.

Citas

ARGEMI, F.; CIANNI, N.; PORTA, A. Disrupción endocrina: perspectivas ambientales y salud pública. En: Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana. 2005, 39(3):291-300.

ARNOLD, S.; COLLINS, B.; ROBINSON, M.; GUILLETTE, L.; MCLACHLAN J. Differential interaction of natural and synthetic estrogens with extracellular binding proteins in a yeast estrogen screen. En: Steroids. 1996, 61(11):642–646.

BIALES, A.; BENCIC, D.; FLICK, R.; LAZORCHAK, J.; LATTIER, D. Quantification and associated variability of induced vitellogenin gene transcripts in fathead minnow (Pimefales promelas) by quantitative real-time polymerase chain reaction assay. En: Environmental Toxicology and Chemistry. 2007, 26(2):287–296.

BUCKLEY, J. Quantifying the antiestrogen activity of wastewater treatment plant effluent using the yeast estrogen screen. En: Environmental Toxicology and Chemistry. 2010, 29:73–78.

CONROY, O.; QUANRUD, D.; ELA, W.; WICKE, D.; LANSEY, K. Y ARNOLD, R. Fate of wastewater hER-agonists and h-ER antagonists during soil aquifer treatment. En: Environmental Toxicology and Chemistry. 2005, 39:2287–2293.

DE BOEVER, P.; PIETERS, G.; SICILIANO, S.; D’HOOGE, W.; VERSTRAET, W. Optimization of a yeast estrogen screen and its applicability to study the release of estrogenic isoflavones from a soygerm powder. En: Environmental Health Perspectives. 2001, 109(7):691-697.

CANADA. ENVIRONMENT CANADA. Guidance document on statistical methods for environmental toxicity test. Ottawa: Environment Canada, 2007. (Environmental Protection Series; 1/RM/46)

GAIDO, K.; LEONEL, L.; LOVELL, S.; GOULD, J.; BABAI, D.; PORTIER, C.; MCDONNELL, D. Evaluation of chemicals with endocrine modulating activity in a yeast-based steroid hormone receptor gene transcription assay. En: Toxicology and Applied Pharmacology. 1997, 143(1):205–212.

JOBLING, S.; COEY, S.; WHITMORE, J. G.; KIME, D. E.; VAN LOOK, K.J.W.; MCALLISTER, B.G.; BERESFORD, N.; HENSHAW, A.C.; BRIGHTY, G.; TYLER, C.R.; SUMPTER, J. P. Wild intersex roach (Rutilus rutilus) have reduced fertility. En: Biology of Reproduction. 2002, 67(2):515–524.

KRISTENSEN, T.; BAATRUP, E.; BAYLEY, M. 17β Ethinylestradiol reduces the competitive reproductive fitness of the male guppy (Poecilia reticulata). En: Biology of Reproduction.2005, 72(1):150–156.

LANGE, R.; HUTCHINSON, T.; CROUDACE, C.; SIEGMUND, F.; SCHWEINFURTH, H.; HAMPE, P.; PANTER, G.; SUMPTER, J. Effects of the synthetic estrogen 17 α ethinylestradiol on the life-cycle of the fathead minnow (Pimephales promelas). En: Environmental Toxicolgyand Chemistry. 2001, 20(6):2001–2012.

LORENZEN, A.; HENDEL, J.; CONN, K.; BITTMAN, S.; KWABIAH, A.; LAZAROVITZ, G.; MASSÉ, D.; MCALLISTER, T.; TOPP, E. Survey of hormone activities in municipal biosolids and animal manures. En: Environmental Toxicoly. 2004, (19):216–225.

NELSON, James. Screening of endocrine disrupting compounds using estrogen receptor transcriptional activation in vitro bioassay. Burnaby: Symon Fraser University, 2007. (Thesis of Master Science)

OLEA SERRANO, N.; ZULUAGA, A. Exposición infantil a disruptores endocrinos. En: An Esp Pediatr. 2001, 54(1):58-62.

PARROTT, J.L.; BLUNT, B.R. Life-cycle exposure of fathead minnows (Pimephales promelas) to an ethinylestradiol concentration below 1 ng/L reduces egg fertilization success and demasculinizes males. En: Environmental Toxicoly. 2005, 20(2):131-141.

PAWLOWSKI, S.; TERNES, T.; BONERZ, M.; RASTALL, A.; ERDINGER, L.; BRAUNBECK, T. Estrogenicity of solid phase-extracted water samples from two municipal sewage treatment plant effluents and river Rhine water using the yeast estrogen screen. En: Toxicology in Vitro. 2004, 18(1):129-138.

ROUTLEDGE, J.; SUMPTER, J. Estrogenic activity of surfactants and some of their degradation products assessed using a recombinant yeast screen. En: Environmental Toxicology and Chemistry. 1996, 15(3):241-248.

THERMO FISHER SCIENTIFIC. Yeast β galactosidase microplate plate assay protocol (non-stopped). En: THERMO FISHER SCIENTIFIC. Yeast β galactosidase assay kit instructions. Rockford: Pierce Biotechnology, 2010. (Nº 75768)

UNIVERSIDAD DE SALAMANCA. Paquete estadístico Simfit. [En línea]. Salamanca: Universidad de Salamanca, [s.d]. [Consulta junio 2010]. Disponible en: http://simfit.usal.es/

WOLFAND, J.; MARYLAND, B. Active ingredient in oral contraceptives (17alfa-ethinylestradiol) alters male competitive courtship behaviors and secondary sexual characteristics in fathead minnows (Pimephales promelas). En: Journal of the U.S. SJWP. 2007.
Sección
Artículos